Oznaczanie azotu metoda KIEJDAHLA z miareczkowym oznaczeniem
końcowym.
Badania wykonane zgodnie z normą:
PN-A-04018:1975
PN-A-04018:1975/Az3 :2002
1. Zasada oznaczania.
Analizowaną próbkę mineralizuje się w stężonym kwasie siarkowym z dodatkiem
selenu jako katalizatora, nadtlenku wodoru jako utleniacza (jeśli jest konieczny) i siarczanu
potasu służącego do podwyższenia temperatury wrzenia kwasu siarkowego. Po mineralizacji
próbki, azot w niej zawarty występuje w postaci kwaśnego siarczanu amonu.
Ostudzony roztwór zadaje się roztworem mocnej zasady i oddestylowuje wydzielony
amoniak do roztworu nasyconego kwasu borowego z dodatkiem wskaźnika mieszanego
(czerwień metylowa + zieleń bromokrezolowa). Roztwór amoniaku w kwasie borowym
oznacza się przez miareczkowanie mianowanym roztworem kwasu solnego (0,04 M do
uzyskania barwy początkowej, takiej jak przed absorpcja amoniaku).
Mineralizacja
1. Odważyć analizowaną substancję do probówki rozkładowej.
2. Dodać katalizator.
3. odmierzyć cylindrem miarowym 3-5 cm3 stężonego H2SO4 i 1-2 cm3 nadtlenku
wodoru (30% H2O2) i wlać do probówki z próbką.
4. Probówki z próbkami umieścić w mineralizatorze, puste otwory mineralizatora
zamknąć zatyczkami (wszystkie otwory powinny być zakryte).
5. Probówki nakryć nasadką odsysającą i założyć zaczepy mocujące.
6. Króćce nasadki połączyć z włączoną pompką wodną.
7. Włączyć przycisk „sieć” i ustawić termoregulator na pozycję „8”.
8. Po 10 minutach sprawdzić czy próbka się zmineralizowała (roztwór kwasu powinien
być klarowny, bezbarwny lub lekko słomkowy).
9. Po zmineralizowaniu wyłączyć przycisk „sieć”, probówki razem z nasadką odsysającą
wyjąć ze stanowisk grzejnych i pozostawić do wystudzenia (ok. 10 minut).
10. Wyłączyć pompkę próżniową, zdjąć nasadkę, wewnętrzne ścianki opłukać wodą
destylowaną (ok. 10 cm3).
Destylacja
1. Sprawdzić aparat destylacyjny, napełnienie zbiorników wody i ługu, otworzyć zawór
wody chłodzącej, wstawić pustą probówkę oraz odbieralnik. włączyć sieć, zawór pary
i przedestylować ok. 100 cm3 wody, wyłączyć zawór pary i sieć.
2. Wstawić probówkę z próbką oraz odbieralnik (kolba stożkowa) z 25 cm3 nasyconego
kwasu borowego ze wskaźnikiem (czerwień metylowa i zieleń bromokrezolowa),
włączyć przycisk „sieć”, przyciskiem NaOH nalać do probówki ok. 20 cm3 ługu.
Miareczkowanie
Zawartość odbieralnika zmiareczkować 0,01 M HCl, punkt końcowy miareczkowania
– gdy barwa wskaźnika wróci do wyjściowej (przed pochłonięciem amoniaku), dla ułatwienia
można stosować roztwór porównawczy.
Zaczęłam po długim oczekiwaniu .
Godziny spędzone w laboratorium…
Setki naważek, powtarzałam nakładanie białka do naczynka po paręnaście razy , aby wyniki były jak najbardziej prawdziwe…
Praca w Labolatorium zaczynała się z samego rana , pierwsza czynność to naważanie odczynników
po dodaniu białka i pozostałych odczynników
gotowa sucha próbka
pierwsza faza mineralizacji
końcowa
dalszy ciag doświadczenia destylacja
miareczkowanie
Po całym procesie doszło do obliczeń
współczynnik
Jaja, 6,25
Mięso i przetwory mięsne i ryby-6,25
Mleko i przetwory -6,38
Wzór i metoda obliczeń
Zawartość białek w próbce, wyrażoną w procentach masy podaje wzór:
× T × 14 × 100 × 6,38
=V- V2 × Tm
w którym:
V
1 to objętość stosowanego w oznaczaniu standardowego objętościowego roztworu kwasu chlorowodorowego ,w mililitrach;
V
2 to objętość stosowanego w próbie ślepej standardowego objętościowego roztworu kwasu chlorowodorowego, w mililitrach;
T to stężenie standardowego objętościowego roztworu kwasu chlorowodorowego w mol/l;
m to masa próbki do analizy wyrażona w gramach.
Obliczyć zawartość białka z dokładnością do 0,1 %.
Autor:
Patka_00
Autor postu otrzymał pochwałę